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            重組蛋白表達


            哺乳動物細胞瞬時表達服務

            服務介紹:
            重組蛋白表達技術可用于多種下游應用,包括基因調控分析、蛋白結構及功能分析、蛋白質間相互作用分析等。我們可提供基于原核、酵母、昆蟲桿狀病毒、哺乳動物細胞等多種蛋白表達系統的蛋白定制服務。
            我們擁有達到cGMP標準的百級潔凈細胞房,擁有豐富的CHO及HEK293細胞表達經驗。
            服務優勢:

            1、美侖生物的哺乳動物細胞蛋白表達技術團隊擁有豐富的CHO及HEK293細胞表達經驗。

            2、哺乳動物瞬時表達系統以HEK293細胞和CHO細胞為表達宿主。

            3、高成功率:我們會分析您的蛋白/抗體基因序列,結合自主研發高表達載體,實驗成功率>95%。

            4、我們專有的高密度(High Density, HD哺乳動物瞬時表達技術,以及優化的表達方案和培養基,確保蛋白和抗體產量達到g級水平。

            5、我公司哺乳動物表達系統可實現復雜糖基化修飾,蛋白活性更高。

            6、可實現瞬時轉染表達,蛋白、抗體的快速小量制備。

            7、具有完備的檢測平臺,如Elisa(酶聯免疫吸附)、SDS-PAGE蛋白凝膠電泳、Western Blot(蛋白質免疫印跡)等檢測平臺,可對蛋白的濃度、純度、活性等多項性能進行評估。

            8、我們實行專人專項管理制度,即在整個項目期間,每個不同的實驗階段,都有相關人員與客戶進行對接,始終保持與客戶間的溝通,保證項目進展的透明化。

            9、通過分步報價、按節點收費的方式,全面降低客戶的風險,極大程度上節約了客戶的成本。

            10、具有一定的靈活性,我們可根據客戶的不同需求,提供不同的實驗方案,盡最大的努力滿足客戶的要求。

            服務內容:

            主要流程

            時間

            內容

            交付內容

            基因合成及密碼子優化

            1-2周

            客戶提供目的蛋白的序列信息或質粒。


            目標基因亞克隆到哺乳動物細胞表達載體

            1-2周

            1.克隆至表達載體
            (可選擇的表達載體,pcDNA3.1等真核表達載體)
            2.質粒測序
            3.質粒制備

            測序報告(若客戶要求)

            小量轉染并通過Western Blot檢測表達

            2-3周

            1.瞬時轉染HEK293/CHO細胞
            2.蛋白純化
            3.QC分析 (SDS-PAGE,UV等)

            1. 0.1-0.5mg純化蛋白樣品
            (如蛋白表達可行)
            2. 質量檢驗報告 (CoA)

            目標蛋白表達及純化

            6-8周

            目標蛋白的再加工及詳細檢測

            篩選穩定高效的細胞株

            周期將延長



            大量表達、純化及檢測(可選)

            3-8周

            100mg或更多蛋白
            QC檢測

            1.純化蛋白
            2.質量檢驗報告 (CoA)

            服務報價:15000元+(不含載體構建)


            畢赤酵母(P.pastoris)表達服務


            服務介紹:
            重組蛋白表達技術可用于多種下游應用,包括基因調控分析、蛋白結構及功能分析、蛋白質間相互作用分析等。我們可提供基于原核、酵母、昆蟲桿狀病毒、哺乳動物細胞等多種蛋白表達系統的蛋白定制服務。
            畢赤酵母蛋白表達服務,會從目的基因的特性,基因劑量,整合位點,以及宿主選擇,轉化子表型和培養條件等多方面入手,再通過文獻查閱,密碼子分析,蛋白表達系統條件優化等途徑生產出高純度蛋白。
            服務優勢:

            1、美侖生物具有豐富的酵母蛋白表達經驗,已成功表達出多種重組蛋白。

            2、我公司具有篩選酵母表達高拷貝菌株的服務,可以滿足客戶的多種特殊需求。

            3、我公司利用酵母表達系統成功表達過具有二硫鍵蛋白及糖基化蛋白,使蛋白具有類似天然的結構和翻譯后修飾,保證了蛋白的活性。

            4、酵母系統表達的過程中,對誘導時間及溫度的控制,對培養條件和菌株生長周期的把握直接影響到重組蛋白表達的成敗,美侖生物的技術人員對整合流程把握和控制,提高表達的成功率及表達水平。高生產率:分泌信號序列保證了重組蛋白的大分泌量。

            5、我公司可提供兩種表達體系:可選擇組成性表達或者誘導表達兩種體系。

            6、我公司具有多種菌株和載體可供選擇:我們提供包括X33, GS115等多種菌株和多種載體。

            7、可進行大規模生產,高達200L的生物反應器保證克級水平蛋白的生產。

            8、我公司具有完備的檢測平臺,如Elisa(酶聯免疫吸附)、SDS-PAGE蛋白凝膠電泳、Western Blot(蛋白質免疫印跡)等檢測平臺,可對蛋白的濃度、純度、活性等多項性能進行評估。

            9、我們實行專人專項管理制度,即在整個項目期間,每個不同的實驗階段,都有相關人員與客戶進行對接,始終保持與客戶間的溝通,保證項目進展的透明化。

            10、通過分步報價、按節點收費的方式,全面降低客戶的風險,極大程度上節約了客戶的成本。

            服務內容:

            主要流程

            內容

            時間

            交付內容

            基因合成及密碼子優化

            客戶提供目的蛋白的序列信息或質粒。

            1-2周


            目標基因的亞克隆及
            P.pastoris表達菌株電轉化

            1.克隆至合適的表達載體
            (可選擇的表達載體:pPICZα-A、pPIC9、pPIC9K、pPIC3.5K)
            2.質粒測序
            3.質粒制備

            1-2周

            測序報告(若客戶要求)

            P.pastoris表達菌株篩選

            酵母表達初篩

            3-4周

            1.1-3mg蛋白
            2.表達評估報告

            酵母表達菌株鑒定
            (可選菌株:X33、GS115)

             

            P.pastoris表達菌株表達優化

            酵母蛋白表達純化
            (根據蛋白表達情況,選擇合適的純化方式)

            3-4周

            大量表達及純化(可選)

            更多蛋白
            QC檢測

            3-8周

            1.純化蛋白
            2.質量檢驗報告 (CoA)

            服務報價10000元+(不含載體構建)


            桿狀病毒-昆蟲細胞蛋白表達服務

            服務介紹:
            重組蛋白表達技術可用于多種下游應用,包括基因調控分析、蛋白結構及功能分析、蛋白質間相互作用分析等。我們可提供基于原核、酵母、昆蟲桿狀病毒、哺乳動物細胞等多種蛋白表達系統的蛋白定制服務。
            桿狀病毒表達系統(baculovirus expression vector system,BEVS)是當今基因工程四大表達系統之一。BEVS屬于真核表達系統,通過BEVS得到的重組病毒易于篩選、具有翻譯后修飾功能、表達外源基因的效率較高。BEVS還可以同時表達多個外源基因,在分泌蛋白生物活性的同時增加產量。因此,BEVS在科研和工業生產中通常應用于大規模重組蛋白的制備。
            服務優勢:

            1、高效性:我們的系統基于最新的技術,保證胞內或者分泌的重組蛋白的高水平表達。具有易于表達異源多聚體蛋白、安全性高等特點,重組表達的蛋白產品具有正確的翻譯后修飾和生物學活性,如二硫鍵的形成、磷酸化、糖基化等。

            2、我公司昆蟲表達系統可表達分子量較大的外源性基因(最高可達200kD),適合大分子蛋白的表達;最高表達量可達昆蟲細胞蛋白總量的50%。

            3、多種昆蟲動物細胞Sf9,Sf21及其它昆蟲細胞系可供選擇。

            4、昆蟲表達系統比哺乳動物細胞表達系統操作簡單。

            5、一站式解決方案,從基因合成到蛋白表達純化。

            6、重組蛋白生物活性高,表達水平高,能同時表達多個基因。

            7、可添加信號肽,促進蛋白更易純化。

            8、相對哺乳動物細胞表達系統成本低。

            9、具有完備的檢測平臺,如Elisa(酶聯免疫吸附)、SDS-PAGE蛋白凝膠電泳、Western Blot(蛋白質免疫印跡)等檢測平臺,可對蛋白的濃度、純度、活性等多項性能進行評估。

            10、我們實行專人專項管理制度,即在整個項目期間,每個不同的實驗階段,都有相關人員與客戶進行對接,始終保持與客戶間的溝通,保證項目進展的透明化。

            11、通過分步報價、按節點收費的方式,全面降低客戶的風險,極大程度上節約了客戶的成本。

            12、具有一定的靈活性,我們可根據客戶的不同需求,提供不同的實驗方案,盡最大的努力滿足客戶的要求。

            服務內容:

            主要流程

            時間

            內容

            交付內容

            基因合成及密碼子優化

            1-2周

            客戶提供目的蛋白的序列信息或質粒。


            目標基因亞克隆到pFastBac供體質粒

            1-2周

            1.克隆至表達載體
            2.質粒測序
            3.質粒制備

            測序報告(若客戶要求)

            制備重組桿狀病毒Bacmid DNA

            2-3周

            1.病毒包裝
            2.病毒擴增


            目的蛋白的表達純化

            2-4周

            1.病毒侵染細胞
            2.小量表達、純化及條件優化
            3.QC分析 (SDS-PAGE,UV等)

            1. 0.1-0.5mg純化蛋白樣品
            (如蛋白表達可行)
            2. 質量檢驗報告 (CoA)

            大量表達、純化及檢測
            (可選)

            3-8周

            100mg或更多蛋白
            QC檢測

            1.純化蛋白
            2.質量檢驗報告 (CoA)

            服務報價:20000元+(不含載體構建)

            大腸桿菌(E.coli)表達系統服務

            服務介紹:
            重組蛋白表達技術可用于多種下游應用,包括基因調控分析、蛋白結構及功能分析、蛋白質間相互作用分析等。我們可提供基于原核、酵母、昆蟲桿狀病毒、哺乳動物細胞等多種蛋白表達系統的蛋白定制服務。
            原核表達系統是通過原核生物來獲得外源蛋白的體系。原核表達是目前常用的重組蛋白表達方式之一,操作相對簡便,要求較低。相對哺乳動物表達系統更加經濟節約。
            服務優勢:

            1、美侖生物擁有豐富的大腸桿菌可溶性蛋白表達、純化及蛋白變復性經驗。

            2、我公司擁有多種E. coli細胞株和表達載體,滿足特定蛋白質胞內表達及周質空間分泌表達需求。也可利用SUMO、GST、Trx及NusA等促融標簽解決蛋白自身疏水性造成不可溶表達問題。提供從密碼子優化到重組蛋白表達、純化的一站式服務以及標簽去除、內毒素去除等附加服務,以滿足不同的定制需求。

            3、針對于有些外源基因在大腸桿菌中重組表達會形成膜包裹的高密度、不溶性蛋白質的包涵體的情況,我們會進行表達系統優化,盡量降低形成包涵體的幾率。

            4、我們會通過評估確定復性條件,進行溫和的包涵體變復性。

            5、我們提供的復性蛋白純度在95%以上。對于客戶要求切除標簽的情況,我們可以做到切標簽不留殘基。

            6、我們具有特色的低溫誘導表達體系,提高了蛋白可溶表達幾率,增加了表達成功和蛋白產物的活性概率??蔀榭蛻籼峁﹥炠|的原核蛋白表達服務。

            7、可進行大規模生產。

            8、具有完備的檢測平臺,如Elisa(酶聯免疫吸附)、SDS-PAGE蛋白凝膠電泳、Western Blot(蛋白質免疫印跡)等檢測平臺,可對蛋白的濃度、純度、活性等多項性能進行評估。

            9、我們實行專人專項管理制度,即在整個項目期間,每個不同的實驗階段,都有相關人員與客戶進行對接,始終保持與客戶間的溝通,保證項目進展的透明化。

            10、通過分步報價、按節點收費的方式,全面降低客戶的風險,極大程度上節約了客戶的成本。

            服務內容:

            主要流程

            時間

            內容

            交付內容

            基因合成及密碼子優化

            1-2周

            客戶提供目的蛋白的序列信息或質粒。


            載體構建

            1-2周

            1.克隆至合適的表達載體(可選擇的表達載體以pET和pGEX系列為主)
            2.質粒測序
            3.質粒制備

            測序報告(若客戶要求)

            表達鑒定及可溶性分析

            1-2周

            1.10mL培養
            2.3個表達條件嘗試
            3.表達菌株的選擇
            4.蛋白表達評估 (SDS-PAGE)

            表達評估報告

            放大表達和1-2步純化

            1-2周

            1.蛋白純化 (可溶表達)
            2.蛋白變性復性純化 (包涵體)
            3.QC分析 (SDS-PAGE,UV等)

            1.0.5-1mg純化蛋白樣品
            (如蛋白表達可行)
            2.質量檢驗報告 (CoA)

            大量表達及純化(可選)

            2-8周

            1.100mg或更多蛋白
            2.QC檢測

            1.純化蛋白
            2.質量檢驗報告 (CoA)

            附加項訂購信息

            時間

            內容

            交付內容

            蛋白去內毒素

            1-2周

            去除蛋白內毒素

            質量檢測報告(CoA)

            服務報價:8000元+(不含載體構建)

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